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动物源性食品中抗病毒类药物残留量测定的前处理方法

点击次数：2341&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;更新时间2021-04-02&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;【关闭】

抗病毒类药物的危害及检测目的

抗病毒类药物主要包括金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、吗啉胍等。金刚烷胺和金刚乙胺是第/一批被允许用来治疗础型禽流感病毒的*药，两者都属于穿入和脱壳抑制剂，抑制病毒的繁殖。研究发现，金刚烷胺可以引起角膜水肿，高剂量摄入时表现出一定的毒性。美金刚和金刚乙胺互为同分异构体，但其性质和作用机理却并不相同。美金刚原被广泛用于中枢神经系统的治疗，具有一定的神经毒性。吗啉胍又被称为病毒灵，是一种广谱抗病毒类药物，对甲型和乙型流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞体病毒等有较好的治疗效果，剂量过大会引起多汗、恶心、低血糖等不良反应。我国在1999年12月将吗啉胍列为禁用药，2005年中华人民共和国农业部第560号公告将金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍这4种抗病毒类药物列为禁用兽药，禁止用于动物生产。虽然抗病毒/药属动物禁用药物，但其在动物养殖过程中依然被广泛使用。若饲养者不科学、不合理地使用该类药物，易导致药物在畜禽机体内残留与富集，不仅会造成畜禽中毒，也会引起病毒耐药毒株的出现，使抗病毒/药物有效性降低，其耐药性也有转移扩散到人体的风险，对消费者的健康存在很大的隐患。

本文阐述了如何将抗病毒类药物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据行标SN/T 4253-2015，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：金刚乙胺、金刚烷胺、美金刚、吗啉胍、咪喹莫特、奥司他韦、阿昔洛韦

应用范围：鸡肉、鸡肉制品、猪肉、肝脏、鱼、虾、蛋、皮蛋等动物组织

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中7种抗病毒类药物用叁氯乙/酸-乙腈混合溶液提取并沉淀蛋白，经混合型阳离子交换固相萃取柱净化后，液相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法定量。

前处理仪器：分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；组织捣碎机、高速冷冻离心机（4 ℃冷冻，18000 r/min）；离心机（5000 r/min）；涡旋混合器；pH计；氮吹仪；固相萃取装置。

检测仪器：HPLC-MS/MS+ESI源

试样制备与保存

鸡肉、肝脏、鱼肉放在组织捣碎机均质，充分混匀，均分成2份，分别装入清洁容器内，并标明标记；鸡肉制品取鸡肉部分；蛋、虾去壳后取可食部分放在组织捣碎机均质，充分混匀，均分成2份，分别装入清洁容器中，并标明标记。

制样操作过程中，应尽可能防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

试样于-18 ℃以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2 ℃～6 ℃贮存72 小时。

前处理方法

1.提取

称取试样5 g（精/确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入0.1 mL内标标准工作溶液（0.1 μg/mL），加入15 mL三氯乙/酸乙腈（90+10）溶液，加盖后在超声波发生器中超声10 min，再旋涡混匀3 min，4 ℃条件下15000 r/min离心5 min，取出上清液，再加入10 mL三氯乙/酸乙腈溶液重复提取一次，离心后合并上清液至25 mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度。

2.净化

分别用3 mL甲醇、3 mL水和3 mL2 %甲酸水溶液活化混合阳离子交换固相萃取小柱（60 mg，3 mL），准确移取5 mL上清液加入到小柱中，依次用5 mL2 %甲酸水溶液和3 mL 1 %甲酸乙腈淋洗，弃去全部流出液；然后真空抽干小柱5 min，用4.0 mL洗脱溶液（氨水乙酸铵甲醇2.5+2.5+95）洗脱至10 mL玻璃管中，在50 ℃用氮气浓缩仪吹至近干。准确加入1.0 mL乙腈-甲醇-水溶液（70+10+20）溶解残渣，涡旋30 s后过0.2 μm滤膜，供液质测定。此样液应在48 h内测定完毕。

注意事项